Otimização e validação de um produto biotecnológico utilizado na extração de DNA.
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Resumo
O ácido desoxirribonucleico, conhecido como DNA é um composto orgânico cujas moléculas contêm as instruções genéticas que coordenam o desenvolvimento e funcionamento de todos os seres, e que transmitem as características hereditárias de cada ser vivo. A sua principal função é armazenar as informações necessárias para a construção das proteínas a partir de RNAs. Na biotecnologia as informações presentes nestas moléculas são analisadas e a partir desta análise é possível diagnosticar modificações na célula, para isso é necessário extrair o material genético da célula. Inicialmente foi desenvolvido in house um produto que consegue extrair o DNA de amostras de sangue e biopsia in natura. Em uma nova etapa desta fase de desenvolvimento, inicia a otimização deste, a ideia é melhorar o produto e validar o produto. Os reagentes já desenvolvidos, seguiram protocolos adaptados de Tost e colaboradores (2003) e Miller et al. (2000), gerando soluções como: lise celular e lise nuclear (soluções de sais para romper a membrana celular e nuclear, respectivamente), solução de purificação (solução alcoólica com função de precipitar restos celulares) e solução de reidratação (solução para ressuspender o material genético), as quais são soluções primordiais para a extração. Neste trabalho mais soluções foram adicionadas ao kit para conseguir extrair o material genético de diferentes amostras, para isso foram estudados diversos protocolos, pois os tipos de amostras são muito diferentes e a otimização de um protocolo específico para cada amostra foi uma das etapas mais importantes apresentadas neste trabalho, no qual foram apresentados protocolos e soluções para extrair DNA de tecido in natura, sangue, biopsia parafinada, bactérias e protozoários. O material genético extraído foi avaliado por espectrofotometria e por visualização em gel de agarose, sendo que o material ainda foi testado em uma PCR. A criação de uma nova imagem para o produto também foi desenvolvida obtendo-se um produto didático seguindo sua finalidade e com custo menor se comparado com outros kits comerciais. O produto foi validado internamente por grupos de pesquisa da UNISC. O objetivo deste projeto foi o aprimoramento do kit "quot;CPTBio DNA Extraction"quot; ampliando seu uso para amostras de biópsia parafinada, bactérias gram negativas e protozoários, com isso conseguimos um produto de extração de DNA desenvolvido in house com um custo menor gerando um DNA de qualidade e quantidade compatíveis para utilização em diversas técnicas moleculares.
Nota
Inclui bibliografia.
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Tipo de obra
Trabalho de Conclusão de Curso
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Local
Santa Cruz do Sul
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